體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗常見問題與解答

—熱點問題—

第一題    一張玻片可觀察到200個中期分裂相嗎？如果不夠，該如何處理？

大多數情況下，一張玻片很難找到200個可用于分析的中期分裂相，建議同一個劑量組多制作一些玻片，本公司一個劑量組通常會制作至少4張玻片，以保證足夠中期分裂相細胞可供分析。

第二題    如何辨別細胞是否處于中期分裂相？

中期分裂相細胞染色體數目、形態比較固定，染色體包含兩條染色單體，具體見下圖：

第三題    有絲分裂指數測定的意義是什么？

中期分裂相指數是指所觀察的細胞中中期分裂相細胞的占比，是一項反映細胞增殖程度的指標。

第四題    油鏡如何使用？是否要將油鏡鏡頭整個浸入油中？

油鏡的使用需要搭配香柏油，香柏油與玻璃的折光率相近，光線穿過載玻片進入香柏油發生折射較少，而進入油鏡的光較多，視野較為明亮。油鏡使用時，需要將油鏡鏡頭浸入香柏油中，并與玻片接觸，使用結束后使用少量二甲苯擦拭干凈鏡頭。

第五題    中期分裂相細胞少是什么原因導致？如何優化？

中期分裂相細胞少的原因如下：

（1）秋水仙素的劑量過小，作用時間過短；

（2）重懸時固定液量過大，細胞密度過低。

優化策略：

（1）秋水仙素劑量大，則作用時間短；

（2）秋水仙素劑量小，則適當延長作用時間，請選擇適宜的劑量和時間；

（3）根據細胞的收集量確定重懸體積；

（4）適當增加滴片的數量。

第六題    染色體聚集可能是由哪些原因導致？

染色體聚集的可能原因如下：

（1）秋水仙素用量過多，導致染色體的過度濃縮；

（2）低滲時間不足，導致染色體聚集在一起分散不開；

（3）細胞懸液未充分吹打均勻；

（4）載玻片未進行預冷，玻片表面張力不夠；

（5）滴片高度不夠。

第七題    染色體分散過度可能是由哪些原因導致？

染色體分散過度的根本原因就是細胞膜破裂。主要由以下可能：

（1）低滲時間過長；

（2）離心速度過高；

（3）細胞操作過程不注意，操作過度；

（4）滴片距離過高。

第八題    染色體畸變試驗閱片需要配套什么樣的顯微鏡？如何操作？

染色體畸變試驗使用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理細胞，使細胞停止在中期分裂相，此時染色體形態、數目都比較固定，使用普通生物顯微鏡即可進行染色體結構畸變觀察。先于低倍鏡下尋找背景清晰、分散良好、染色體收縮適中的中期分裂相細胞，再于油鏡下進行染色體畸變觀察并記錄。

第九題    玻片想要長期保存，需要如何處理？

如果玻片要長期保存，必須要做好封片（可使用中性樹脂膠并加蓋玻片），并置于陰涼干燥處保存。

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